Rt-Pcr Detection of African Horse Sickness Virus Serogroups in Cell Culture

In the present work, a reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) protocol was carried out to detect African horse sickness virus (AHSV) RNA in vero cell culture. The nine serotypes of African horse sickness virus were used in this study . All these serotypes were propagated in vero cell culture. RNAs were extracted from these serotypes and then, they were detected by the described RT-PCR assay, using primers derived from segment 3 of AHSV serotype 6. The specific 240 bp PCR products were amplified from all AHSV serotypes used in the study, and they were visualized on ethidium bromide-stained agarose gel. The Amplification product was not detected when the RT-PCR assay was applied to RNA from bluetongue virus (BTV) or palyam virus. This specific 240 bp PCR product was obtained from an mount of 10 pg ,1.0 pg, 100fg, RNA from AHSV serotype (6). The results of this study showed that the described RT-PCR assay, using the mentioned primers, could be applied for detection of AHSV serotypes. In conclusion, the AHSV RT- PCR can solve the problems which are found in virus isolation procedures. The rapidity, sensitivity and specificity of the RT- PCR assay would greatly facilitate detection of AHSV infection in an out break among susceptible equine.

أجريت هذة الدراسه لكشف مورثات فيروس طاعون الخيل الافريقى (فيروس مرض النجمة) في الخلايا المستزرعة المصابة, وذلك .باستخدام تفاعل البلمرة المتسلسل العكسى . حيث أجرى الكشف على تسعة انماط مصلية للفيروس واستزراعه في خلايا الزرع الخلوى (فيرو). استخلاص الحمض النووى الريبى منها . استخدم في هذة التجربة زوج من المبادئات مشتق من الفص رقم 3 من جينوم النمط المصلى 6 لفيروس طاعون الخيل الافريقى, والذى يتطلب عدد قليل من الخلايا المصابة للإنتاج إشارة هجين موجبة مقارنة مع بوادىء الاحماض النووية الاخرى التى استخدمت في الكشف عن فيروس طاعون الخيل الافريقى . تم إكثار ناتج تفاعل البلمرة المتسلسل البالغ طوله 240 زوج قاعدى من جميع الانماط المصلية لفيروس طاعون الخيل الافريقى المستخدمة فى الدراسة , وتم إظهاره فى هلام الاغاروز المصبوغ ببروميد الايثيديوم . أظهر هذا الزوج من البوادىء خصوصية لهذة الفيروسا ت حيث لم يتم إكثار الناتج عند إجراء تفاعل البلمرة المتسلسل العكسى على الحمض النووى الريبى المستخلص من فيروسات أخرى من نفس العائلة مثل فيروس ذات اللسان الازرق أو من فيروس باليام . هذا الناتج فائق الخصوصية تم إكثاره من كميات مختلفة من الحمض النووى الريبى المستخلص من النمط المصلى 6 لفيروس طاعون الخيل الافريقى وهى 10 بيكوجرام , 1.0 بيكوجرام و 100 فمتوجرام. من جينوم الفيروس أى ما يعادل أو يفوق حساسية عزل الفيروس بالطرق التقليدية. وهذا ما يؤكد حساسية تفاعل البلمرة المتسلسل العكسى فى الكشف عن فيروس طاعون الخيل الافريقى . ختاما ,فان نتائج هذة الدراسة توضح أن تفاعل البلمرة المتسلسل العكسى باستخدام البادئات المذكورة سابقا, يمكن إستخدامة كاختبار تشخيصى بسيط ,سريع ,ذو خصوصية و حساسية لحل الصعوبات الموجودة فى الطرق التقليدية المستخدمة فى تشخيص فيروس طاعون الخيل الافريقى . يمكن في دراسات لاحقه، استخدام تفاعل البلمرة المتسلسل العكسى للكشف عن فيروس طاعون الخيل الافريقى مباشرة فى عينات اكلنيكيه مثل الدم وأنسجة الحيوانات المصابة طبيعيا وذلك باستخدام بادئات داخلية (ب3 وب4 ) للبادئات الخارجية (ب1 وب2 )